人癌胚抗原（CEA）含量檢測(cè)原理

背景介紹：

癌胚抗原（CEA）描述了一組參與細(xì)胞粘附的高度相關(guān)的糖蛋白。它通常在胎兒發(fā)育過(guò)程中的胃腸組織中產(chǎn)生，但在出生前停止產(chǎn)生，所以CEA在健康成年人血液中的含量通常很低（約2-4納克/毫升）。然而，在某些類(lèi)型的癌癥中血清水平會(huì)升高，這意味著它可以在臨床試驗(yàn)中作為腫瘤標(biāo)志物使用。重度吸煙者的血清水平也會(huì)升高。CEA是糖基磷脂酰肌醇（GPI）細(xì)胞表面錨定的糖蛋白，其專(zhuān)門(mén)的硅藻糖基化糖型可作為功能性結(jié)腸癌L-選擇素和E-選擇素配體，可能對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散至關(guān)重要。從免疫學(xué)角度看，它們的特征是CD66分化簇的成員。這些蛋白包括CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e、CD66f。

檢測(cè)原理：

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人癌胚抗原（CEA）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人癌胚抗原（CEA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成

注：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：40、20、10、5、2.5、1.25 ng/mL

2.  經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本50μL，空白孔不加。樣本不足的情況下，上樣量最少10μL。操作方法：待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL。

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。