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促黃體生成激素放免試劑盒怎么操作

更新時(shí)間:2017-04-22      瀏覽次數(shù):1831

促黃體生成激素放免試劑盒基本信息簡(jiǎn)介

中文名 促黃體生成激素;外文名  luteinizing hormone;屬于促性腺激素的一種 簡(jiǎn)    稱 LH 亦稱促間質(zhì)細(xì)胞激素。促黃體生成激素是由腦垂體前葉嗜堿性細(xì)胞分泌的,它作用于成熟的卵胞,能引起排卵并生成黃體。還可促進(jìn)黃體、內(nèi)莢膜和間質(zhì)細(xì)胞分泌動(dòng)情素。在雄性動(dòng)物,它作用于睪丸的間質(zhì)細(xì)胞促進(jìn)其分泌雄性激素。由于雄性激素的作用,在第二性征發(fā)育過(guò)程中,精子完成發(fā)育。LH促進(jìn)類固醇激素合成作用,據(jù)認(rèn)為是以生成作為第二信息的cAMP為媒介的。LH為糖蛋白,分子量約3萬(wàn)。在酸性溶液中,可解離成分子量約為15000的互不相同的兩個(gè)單基物(亞單位)。

羊的LH的兩條多肽鏈(單基物)的氨基酸排列已經(jīng)確定。其單基物之一與促卵泡激素(FSH)和促甲狀腺激素(TSH)的單基物之一方有著共同或相似的結(jié)構(gòu)。腦垂體分泌的LH,是受丘腦下部生成的黃體生成素釋放因子所促進(jìn)的。

促黃體生成激素放免試劑盒操作方法簡(jiǎn)介

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

3、加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

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